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白血病細胞株的凍存及復蘇

更新時間:2016-12-24      點擊次數:2315
     白血病細胞株通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物也就是說,它是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。
    白血病細胞株的凍存及復蘇:
    白血病細胞株的凍存:為避免污染造成的損失,zui小化連續細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉化,需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前,細胞應該特性化并檢查是否污染。
    有幾種普通培養基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養基,成分可能如下:
    ◆包含10%甘油的*培養基,
    ◆包含10%二甲基亞砜(DMSO)的*培養基,
    ◆50%細胞條件培養基和50%含有10%甘油的新鮮培養基,或
    ◆50%細胞條件培養基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養基。
    對于無血清培養基,一些普通的培養基成分可能是:
    ◆50%細胞條件無血清培養基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養基,或
    ◆包含有7.5%二甲基亞砜和10%細胞培養級BSA的新鮮無血清培養基。
    1.懸浮細胞
    ●計數將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數生長期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細胞,使用移液管移去上清到zui小體積,不要攪亂細胞。
    ●以1×107到5×107細胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養基中再次懸浮細胞,或者以0.5×107到1×107在無血清培養基中,再次懸浮細胞。
    ●分裝進凍存管,將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內開始冷凍步驟。
    ●細胞以1℃/分鐘進行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉移到液氮中貯存。
    2.貼壁細胞
    ●使用分離試劑從基層分離細胞,分離時盡可能溫和,使對細胞的損傷減少到zui小。
    ●在*生長培養基中,再次懸浮分離細胞,確定有活力細胞數。
    ●以大約200g離心5分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到zui小體積,不要攪亂細胞。
    ●以5×106到1×106細胞/ml密度,在凍存液中懸浮細胞。
    ●分裝進凍存管,將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內開始冷凍步驟。
    ●細胞以1℃/分鐘進行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉移到液氮中貯存。
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